細(xì)胞凍存解決方案
更新時間：2015-12-08 點擊次數(shù)：3174
細(xì)胞凍存解決方案
細(xì)胞凍存步驟：
1.預(yù)先配制凍存液：10 % DMSO + 90%胎牛血清，4℃冰箱保存預(yù)冷； 2.用胰酶對細(xì)胞進(jìn)行消化：倒去培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基或用槍小心吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基，PBS沖洗兩次，用胰酶消化細(xì)胞（盡可能溫和）； 3.再次用*培養(yǎng)液懸浮細(xì)胞，將預(yù)冷的凍存液加入消化*的細(xì)胞中，用滴管輕輕吹打混勻。 4.在每支凍存管中加入1ml細(xì)胞液，密封后標(biāo)記凍存細(xì)胞名稱和凍存日期。 5.凍存步驟的細(xì)致直接關(guān)系到細(xì)胞復(fù)蘇時的活力，如果有程序降溫器（放在-80℃冰箱過夜，放入液氮罐）；或者可以在4℃，2h；然后轉(zhuǎn)到-20℃，2h；-80℃，2h；放入液氮罐。
解決方案：
1.凍存液：A:dmso 推薦 sigma （貨號D2650-100ml） B:胎牛血清根據(jù)自己習(xí)慣 1.DMSO 不用高壓滅菌;DMEM不能高壓 滅菌 2.DMSO要用新的 ,而且要避光保存.. 3.DMSO:含10%FBS的DMEM=1:9(體積比) 2.胰酶（hyclone 貨號 sh30042.01） pbs （hyclone 貨號sh30256.01b） 培養(yǎng)瓶，離心管 推薦coring 或者 falcon 槍頭 推薦axygen （axygen槍頭已經(jīng)基本國產(chǎn)化） 3.凍存管 推薦axygen的彩色凍存管，有各種顏色的蓋子，方便分類。且性價比較高。目前市場上nunc 和corning的一次性凍存管使用也很廣泛，但如果量大不如axygen凍存管劃算?，F(xiàn)在還提供底部印有二維碼的方便識別的凍存管。 4.凍存盒：推薦使用biologix的紙質(zhì)凍存盒，標(biāo)注清晰，書寫后不容易掉色，且有各種顏色可選。同時也 有塑料凍存盒供使用。質(zhì)量高，價格低。 5.程序降溫盒：推薦 nalgene（貨號 5100-0001）。使用zui廣，*的程序降溫盒。 6.液氮罐：根據(jù)需求，1000個樣本的儲存空間，推薦金鳳的yds-50b-125，含6個6層25孔方提桶，保 護(hù)罩及一只真空安全帽，含不銹鋼盒，zui多放900只樣本。 7.另外還有冷凍記號筆，不銹鋼凍存盒架，細(xì)胞濾網(wǎng)，凍存管支架等等。
液氮罐使用注意事項：
1. 容器的使用維護(hù)：充液氮前要用少量的液氮預(yù)冷；補充液氮的時機是液氮剩余量為總?cè)萘康?/3為宜； 嚴(yán)禁在容器蓋上放置物體和密封瓶口；嚴(yán)防敲擊碰撞。 2. 不能用其他塞子代替罐蓋，更不能密封塞子，以免液氮蒸發(fā)，壓力增高，損傷容器；檢查容器液 面高度時，應(yīng)用塑料小棒或?qū)嵭男∧景舨迦氲撞?，過5-10s后取出，結(jié)霜的長度即為液面高度。
